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By Martin Holtzhauer

M. Holtzhauer hat in seinem Werk biochemische Methoden und Stoffdaten zusammengestellt. In shape von uberpruften Laborvorschriften sind vielseitig einsetzbare Arbeitsanleitungen fur die analytische Proteinbiochemie sowie ausgewahlte Beispiele fur praparatives Arbeiten aufgenommen und mit zahlreichen Tabellen erganzt. Um eine leichte Handhabung zu gewahrleisten, wurde auf theoretische Einfuhrungen in die jeweiligen Methoden weitestgehend verzichtet und statt dessen auf Spezialliteratur verwiesen. Das Methodenspektrum reicht von quantitativen Bestimmungsmethoden uber elektrophoretische und immunchemische Protokolle bis zu Rezeptor- und Enzymassays, von allgemeinen praktischen Hinweisen zu chromatographischen Verfahren bis zu Beispielen mehrstufiger Proteinisolierungen.

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In die vordere Kammer des Mischers (Abb. 2) kommt die schwere, "saure" Losung sL entspr. Tab. 12 (47,5 % des GieBkassettenvolumens). Dann wird kurz der Verbindungshahn geOffnet, urn die Luft im Verbindungskanal zu verdrangen, dann wird hinten die leichte, "basische" Losung bL (47,S % des GieBkassettenvolumens) eingefiillt. Es wird in jede Mischerkammer die angegebene Menge an Ammoniumpersulfat -Losung C gegeben, kurz gemischt, dann werden beide Hahne des Gradientenmischers geoffnet und man laBt in einem kontinuierlichen Flussigkeitsstrom die Gelmischung in der Mitte der GieBkassette einflieBen.

Die Eichkurve wird mit 10 mM KH 2P0 4 in 0,5 M Perchlorsaure als Standard im Bereich von 5 bis 100 nmol Phosphat aufgenommen. WOLLENBERGER (1958) Biochem. Z. 2 Bestimmung von Gesamt-Phosphat Fiir Phosphatbestimmungen sind unbedingt phosphatfreie Glaser zu verwenden, sofern nicht mit Einmal-Plastrohrchen gearbeitet wird. a. Salzsaure etwa 15 Minuten ausgekocht und anschlieBend griindlich mit dest. Wasser nachgespiilt werden. Die fiir die Phosphatbestimmung verwendeten Glaser sollten gesondert aufbewahrt werden.

Biochem. 4 In diesem System konnen alkalilabile Proteine (z. B. Acylphosphat-Phosphoproteine) unter denaturierenden Bedingungen entsprechend ihrer relativen Molmasse aufgetrennt werden. Trotz der relativ geringen Polyacrylamidkonzentration (T = 5,61 %, C = 3,61 %) ist die Trennung im Molmassenbereich zwischen 10 und 150 kD sehr gut. Da es sich urn ein SDS-PAGE-System handelt, laufen die Proteine trotz des niedrigen pH-Werts von ,,-" nach ,,+". L6sungen A 40,0 % Acrylamid (w/v) und 1,5 % Methylen-bis-acrylamid in dest.

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